科研服务
TA克隆技术(TA cloning)利用Taq聚合酶具有末端转移酶(TdT)活性,但却不具有3'-5'端外切酶校准活性的特点,可在PCR产物的3'端加上一个非模板依赖碱基“A”。pMD18-T是一种高效克隆PCR产物的专用载体,它是由pUC18载体在Xba I和Sal I识别位点间插入一个EcoR V位点,然后用EcoR V进行酶切使质粒线性化,并在它的3'端添加“T”构建而成。因其3'端带有一个突出的“T”尾,能高效地与带“A”尾的PCR产物连接,极大地提高了克隆的效率。TA克隆是目前克隆PCR产物最简便、快捷的方法。
产品内容
插入片段大小 | 交货周期 | 价格(元) | 备注 |
---|---|---|---|
< 800 bp | 5个工作日 | 200元/个 | |
800~2000 bp | 7个工作日 | 请询价 |
服务说明
- 请提供克隆片段的相关信息,包括名称,大小、样品是否带有”A”尾以及PCR产物是否已纯化。
- 已纯化的PCR产物请确保使用的溶剂为灭菌的双蒸水。
- 请提供浓度≥20ng/μl,总体积≥50μl的PCR产物,所需DNA的总量会随片段大小的不同而有所变化。
- 请务必在订单上注明PCR所用引物序列,以便用于克隆结果的核对分析。
- 当克隆结果中包含合作伙伴提供的单项部分引物序列,我们即视实验成功,将收取全额的实验费用。
- 若序列中包含高GC、Poly等特殊或复杂结构导致测序和中断,我们即视实验成功,将收取全额的实验费用。
- 项目完成一个月后,若合作伙伴无要求返还菌液或质粒等,则我们将代为销毁。
实验步骤
鉴定样品DNA片段长度和浓度
加“A”尾(若PCR产物已带“A”尾则跳过此步)
PCR产物和pMDI8-T载体连接
转化并筛选重组子
重组子测序
测序结果分析
订购信息
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